图像源网络：WB实验流程Western Blot Western Blot灵敏度和特异性取决于抗体质量。
理想情况下，您可以选择与样本类型不同的一抗。
如果可能，选择KO验证的一抗（KO）以确保其符合预期目的。
KO验证的抗体可以显着降低（如果不消除）目标。
点击下面的链接查看KO验证详细信息。排除验证：抗体验证的特异性是什么？
在观察蛋白质后，您需要选择与一抗结合的二抗。
使用辣根过氧化物酶（HRP），碱性磷酸酶（AP）酶如蛋白质印迹或特异性优化的缀合荧光（例如IRDye？）。
串联连接的二抗提供高水平的灵敏度。
HRP或AP二抗的灵敏度增加的原因是这些二级和一级抗体可以在多个位置组合以放大信号。
在本文中，我们介绍了Abcam用于WB的一些最佳二抗。
网络照片：WB，WB用于优化与HRP和AP结合的二抗，其结果更差，是检测特定蛋白质最敏感的技术之一。实验的最后一步使用标记的二抗获得特定蛋白质。
与直接直接一抗相比，HRP二抗的使用具有显着的优点，其可显着提高灵敏度。
这是因为第二抗体在多个位点结合第一抗体，这允许多个第二HRP一抗与一个分子缀合，每个分子具有多个HRP或AP标记。可以。
HRP和AP二抗是WB的理想选择，因为它们可以扩增复杂蛋白质混合物中的信号并简化靶蛋白检测。
第二，此处具体概述了与HRP缀合的二抗和WB的AP。二抗从Abcam结合到HRP和从AP到WB。
靶向HRP二抗AP二抗山羊抗兔IgG H＆L抗体ab 205718 ab 6722山羊抗小鼠IgG H＆L抗体ab 205 719 ab 7069山羊抗大鼠IgG H＆L抗体ab 205 720 ab 6846驴抗小鼠IgG H＆L抗体ab 205 724 ab 97 027抗兔IgG VHHH二抗WB Abcam用于WB应用，WB申请使用HRP和AP彻底测试和优化HRP和AP二抗。这确保了WB实验具有高稀释度，高信号和低背景。
这些抗体在文献中被广泛引用。
AP二抗通常具有1 / 5,000至1 / 50,000的稀释度。
如果稀释度是1 / 5,000，则可以仅用一个二抗AP进行1,500WB的分析。
HRP二抗的稀释度通常在1 / 2,000到1 / 20,000之间变化。
如果稀释比为1 / 2,000（在3ml牛奶/ BSA中稀释），则使用单个HRP二抗管可进行600WB测定。
本文的部分内容来自Abcam的官方网站。
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